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【主要成分与含量】 序号 成分 含量 1 PCR反应液 1管(1ml/管) 2 裂解稀释液 4管(2.5ml/管) 3 阴性对照 1管(0.5ml/管) 4 阳性对照 1管(0.5ml/管) 5 说明书 1份 【作用与用途】本亚博赛事资讯适用于猪血液、猪肉组织、淋巴结、脾脏等样本中非洲猪瘟病毒核酸的检测。 【用法与判定】 1 用法 1.1 样品处理及模板准备 1.1.1 样品处理 ?组织样品处理:分别从猪肉组织、淋巴结、脾脏不同位置取样,用手术剪剪碎混匀后取0.1g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理盐水继续研磨,待匀浆后转至1.5ml无菌离心管,12000 r/min离心2分钟,取上清200μl备用。 ?血液样品无需处理,取200μl备用。 1.1.2 模板准备 ?根据待检样品数量,准备无菌1.5ml离心管,并做好标记。 ?每管加入190μl裂解稀释液。 ?每管分别加入已处理的待检样品10μl,充分混匀,室温放置2分钟。 ?12000 r/min离心1分钟,上清即为模板DNA。 1.1.3可利用商品化亚博赛事资讯提取核酸进行反应,效果更佳 1.2 荧光PCRyabo88vip1com 1.2.1 试剂准备 实验前20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温,使其完全融化,充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。 1.2.2 配制反应体系 按下表1体系,在配套PCR管中配制反应体系,盖紧管盖后瞬时离心10秒,转移至yabo88vip1com区。 表1 PCR反应体系 成分 体积 PCR反应液 20μl 预准备的模板(样本/对照) 5μl 总体积 25μl 1.2.3 PCRyabo88vip1com 开机预热并检验仪器性能后,取配制好体系的PCR反应管,放置在样品槽相应位置,记录顺序,按下表2设置yabo88vip1com参数,进行PCRyabo88vip1com。 表2 仪器PCRyabo88vip1com参数 阶段 温度 时间 循环数 1 95℃ 3 min 1 2 95℃ 15 s 45 60℃ 30 s(采集荧光信号) FAM通道采集荧光信号 2 判定 2.1 合理调整阈值线,不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。 2.2 亚博赛事资讯有效性判定 ?阴性对照:无Ct值,线形为直线或微斜,无明显指数增长。 ?阳性对照:Ct值≤30,有明显指数增长,呈典型的S型曲线。 2.3 样本结果判定 ?样本检测结果Ct值≤40,有明显指数增长,判定为阳性,表明样本中检测出非洲猪瘟病毒。 ?样本检测结果40<Ct≤45,判定为可疑。应对样本进行复测,若复测结果Ct值仍在40~45之间,有明显指数增长,则判定为阳性,否则为阴性。 ?样本检测结果无Ct值,判定为阴性,表明样本中未检测出非洲猪瘟病毒。 【注意事项】 (1)实验前请仔细阅读本亚博赛事资讯说明书,严格按步骤执行,不使用本亚博赛事资讯提供的组份或不按照说明书进行实验可能导致错误结果。 (2)所有试剂应在规定温度储存。-20℃保存的试剂在使用前应充分混匀。亚博赛事资讯反复冻融次数不宜超过5次。 (3)实验操作应按照国家有关临床基因yabo88vip1com实验室管理规范执行,实验过程应分区(试剂准备区、样本制备区、核酸yabo88vip1com区),各区物品为专用,不得交叉使用,避免污染。 (4)操作台、移液器、离心机等仪器用品应经常用1%次氯酸钠、75%乙醇或紫外灯进行消毒。耗材应进行无酶处理。 (5)待检样本、亚博赛事资讯组份及实验中的废弃物需按照具有潜在传染性物质处理方法进行处理。 (6)为防止荧光干扰,应避免使用含荧光物质的手套,避免用手直接接触,预防交叉污染。 (7)检测结果为阴性,并不完全代表为非感染状态,具体诊断需结合兽医临床。 (8)产生假阴性的可能原因为:待检样本在采集、运输、保存及核酸提取过程中操作不当造成DNA降解;样本中核酸浓度低于最低检测限;病毒待测靶基因出现变异;未经验证的其他干扰因素。 (9)产生假阳性的可能原因为:待检样本采集、运输及核酸提取过程中发生交叉污染。 【规格】 50反应/盒 【贮藏及有效期】 亚博赛事资讯-20℃以下冷冻避光保存,有效期为12个月。 【批准文号】 【研发单位】北京市动物疫病预防控制中心 北京兰伯瑞生物技术有限责任公司 【生产企业】 广州悦洋生物技术有限公司 仅供兽医诊断使用
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